Микроскопические исследования. Для визуального обнаружения Treponema pallidum проводят микроскопию нативных препаратов в темном поле. Взятый материал должен быть исследован немедленно в нативном состоянии, поскольку трепонемы легче обнаруживаются, пока они живые, благодаря их характерным движениям, отличающим их от трепонем – сапрофитов.
К достоинствам этого метода относятся: краткие сроки проведения исследования и относительная дешевизна. Недостатки метода: необходимость наличия высококвалифицированного персонала, эффективность исследований лишь при свежих (первичный, вторичный, ранний врожденный) формах сифилиса, невозможность обеспечения количественного учета содержания трепонем в организме больного.
Показанием к проведению темнопольной микроскопии служит наличие эрозивно- язвенных элементов на коже, в основном, в области гениталий, кожных складок и слизистых. Обнаружение бледной трепонемы подтверждает диагноз ранних манифестных форм приобретенного сифилиса – первичного и вторичного. Метод показан также при диагностике раннего врожденного сифилиса с проявлениями на коже и слизистых оболочках в виде пузырей, эрозивных папул и широких кондилом.
Положительный результат микроскопического исследования в темном поле рассматривается как основание для установления диагноза и назначения лечения. При отрицательном результате показано повторное (до 3 раз) исследование после применения примочек физиологическим раствором. Отрицательный результат не является основанием для исключения диагноза сифилиса и требует дальнейшего подтверждения методами серологической диагностики.
Существуют также методы визуального обнаружения бледной трепонемы в фиксированных препаратах (мазки и гистологические препараты), окрашенных по методу Романовского-Гимзы, серебрения по Морозову и др. Эти методы, в силу их трудоемкости, используются в основном в научных исследованиях, в диагностике третичного сифилиса (бугорковых и гуммозных высыпаний), в патоморфологических исследованиях.
Для обнаружения АГ микроорганизма используют метод ПИФ. Метод прост технически и более безопасен для персонала, чем темнопольная микроскопия, т. к. трепонемы в мазках фиксированы. Отсутствие необходимости сохранять трепонемы живыми делает возможным просмотр мазков в любые сроки после их приготовления. Поскольку конъюгаты специфичны только для патогенных бледных трепонем, не требуется дифференцирование с трепонемами-сапрофитами. Метод может быть использован для выявления АГ возбудителя сифилиса как в мазках серозного отделяемого сифилидов, так и в тканевых срезах у пациентов с кожными проявлениями сифилиса, поражением лимфатических узлов и внутренних органов. Специфичность метода – 80%, чувствительность – до 95%.В России этот тест практически не применяется в связи с отсутствием промышленного производства и сертификации меченых моноклональных АТ к бледной трепонеме.
Для выявления ДНК трепонемы используют метод ПЦР. Метод наиболее эффективен при ранних стадиях заболевания, сопровождающихся развитием эрозивно-язвенных поражений и накоплением возбудителя в очаге инфекции. Основными достоинствами ПЦР-исследования являются высокая чувствительность (80–94,7%) и специфичность (до 100%). К этому следует добавить быстроту получения результата, минимальный объем пробы для анализа, возможность одновременного исследования нескольких возбудителей заболеваний. В качестве материала для исследования могут быть использованы серозное отделяемое сифилидов и СМЖ. При исследовании сыворотки крови метод не информативен.