Род Helicobacter входит в семейство Helicobacteraceae, класс Epsilonproteobacteria. Helicobacter pylori – грамотрицательные подвижные палочки, слегка изогнутой, спиралевидной или S-образной формы, длиной до 3 мкм, диаметром 0,5–1 мкм. В отличие от свежевыделенных штаммов, при хранении в лабораторных условиях старые культуры H.pylori имеют «кокковою» форму. H.pylori является микроаэрофильным микроорганизмом: для культивирования необходимы газовые смеси, содержащие кислорода – 5 %, углекислого газа – 7–10 %, азота – 80–85 %, водорода – 8–10 %, относительная влажность газовой среды – 98–100 %. Оптимальная температура роста 37°С. У человека H.pylori ассоциирован с хроническим гастритом, язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки, лимфомой (мальтомой) желудка и раком желудка.
Показания к обследованию. Хронический гастрит, язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки, лимфомы, рак желудка.
Материал для исследований. Биоптаты слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки; образцы фекалий, желудочный сок, зубной налет, сыворотка крови.
Этиологическая лабораторная диагностика включает посев клинического материала с дальнейшей культуральной и биохимической идентификацией возбудителя, определением антибиотикочувствительности; выявление ДНК микроорганизма; обнаружение специфических АТ к АГ Helicobacter pylori. Скрининговые экспресс тесты, такие как определение уреазной активности возбудителя в биоптатах желудка, гистологическое исследование биоптатов, дыхательные тесты, носят ориентировочный характер.
Сравнительная характеристика методов лабораторных исследований. Посев биопсийного материала слизистой оболочки желудка, полученного при эндоскопическом обследовании, является наиболее информативным из используемых методов, он позволяет проводить дополнительные исследования (определение чувствительности микроорганизма к антибиотикам), однако высокая трудоемкость такой диагностики делает ее малораспространенной. Принадлежность выделенной культуры к роду Helicobacter оценивается на основании морфологии колоний и культуры в мазке, окрашенном по Граму, а также по ферментативным свойствам (продукция уреазы, каталазы и оксидазы). Дифференциальная диагностика H.pylori проводится с Сampylobacter jejuni.
Наибольшее распространение на практике получили экспресс-методы исследования биоптатов слизистой желудка, основанные на выявлении уреазной активности микроорганизмов, присутствующей в таких препаратах. По диагностической специфичности и чувствительности они уступают прямым методам выявления возбудителя, кроме того, требуют инвазивной процедуры получения биоптатов при эндоскопии. Чувствительность и специфичность данных тестов существенно варьирует при использовании реагентов разных производителей.
Выявление ДНК методом ПЦР в сравнении с быстрыми уреазными тестами обладает более высокой чувствительностью и специфичностью, в сравнении с культуральными исследованиями – меньшей трудоемкостью, с гистологическими исследованиями – меньшей субъективностью. Наборы реагентов для диагностики инфекции с использованием ПЦР предназначены как для обнаружения ДНК H.pylori, так и для характеристики генов, кодирующих факторы вирулентности патогена.
Выявление в сыворотке крови пациента специфических АТ к АГ микроорганизма используется для первичной диагностики инфекции. Недостатком такого способа диагностики является отсутствие возможности контролировать результаты этиотропного лечения после его окончания, так как уровень специфических АТ медленно снижается после эрадикации H.pylori. При первичной диагностике инфекции положительный результат обнаружения АТ, клинические симптомы и эндоскопически выявленная язвенная болезнь желудка/двенадцатиперстной кишки или эрозивный гастрит достаточны для обоснования диагноза и использование дополнительных методов диагностики не требуется. В Европейских странах выявление АТ методом ИФА является наиболее распространенным методом диагностики инфекции Helicobacter pylori, позволяющим диагностировать наличие возбудителя без эндоскопического обследования.
Показания к применению различных лабораторных исследований. Посев материала, отобранного с использованием инвазивных процедур, с дальнейшей культуральной и биохимической идентификацией возбудителя, выполняют по клиническим показаниям. Выявление АТ используют для первичного скрининга.
Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований. Выявление возбудителя культуральным методом или обнаружение ДНК возбудителя методом ПЦР являются достоверным подтверждением инфицированности. Обнаружение АТ к H.pylori свидетельствует об инфицированности данным возбудителем и может указывать на хронический гастрит типа В, язвенную болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки. Уровень специфических АТ коррелирует с массивностью обсеменения слизистой желудка H.pylori и патоморфологической картиной процесса. Обнаружение АТ выявляют факт инфицирования при манифестных, субклинических формах, а также в стадиях ремиссии заболевания. Терапию не назначают на основании результатов выявления АТ к H.pylori, для уточнения диагноза рекомендуется проведение эндоскопического исследования.
При выявлении специфических АТ могут быть получены ложноотрицательные результаты, обусловленные несколькими причинами: особенностями иммунной системы пациента, не вырабатывающей АТ к АГ H.рylori, взятием проб крови на исследование на ранней стадией инфицирования возбудителем, недостаточной чувствительностью используемого метода. Ложноположительный результат может быть получен у новорожденных (трансплацентарная передача АТ от матери); после санации (эрадикации возбудителя и достоверном отсутствии его в тканях по результатам бактериологического исследования) в течение 6 месяцев.