Возбудителем гемофильной инфекции является бактерия Haemophilus influenzae (или палочка Пфейффера) из семейства Pasteurellaceae (Hib). Длительное время гемофилы считались возбудителем гриппа, так как эта инфекция наиболее часто протекает в форме ринофарингита или ОРЗ без специфических особенностей, что и обусловило такое название. Бактерия представляет собой мелкую полиморфную палочку, иногда по форме напоминающую коккобациллу. Спор нет, имеет капсулу. Для культивации требует кровь, специальные добавки и витамины. В зависимости от различий химического строения и антигенных свойств капсулы выделяют 6 серотипов H. influenzae (серотипы a, b,c,d,e,f), а также бескапсульные штаммы.
Инфицирование гемофильными палочками редко приводит к заболеванию, однако спектр инфекционных поражений может быть чрезвычайно широк и зависит от серотипа возбудителя. У взрослых H.influenzae вызывает преимущественно очаговую бронхопневмонию, часто сочетающуюся с выраженным трахеобронхитом. Пневмония редко приобретает тяжелое течение, но в отдельных случаях может осложниться экссудативным плевритом, перикардитом, менингитом, артритом и т.п. Гемофилы входят в состав нормальной флоры верхних дыхательных путей, уровень бессимптомного носительства у детей достигает более 40%.
Наиболее патогенными свойствами и способностью вызывать тяжелые формы заболевания обладает H.influenzae тип b (Hib). Ее вирулентные свойства связаны преимущественно с капсульным полисахаридом и продукцией мембранотоксина.
При инвазивных формах заболевания возбудитель выявляется в стерильных жидкостях организма – СМЖ, крови, плевральной жидкости и др. К неинвазивным формам инфекции относится пневмония (без бактериемии), синусит, средний отит, ринофарингит, конъюнктивит. При генерализации инфекционного процесса развиваются инвазивные формы инфекции, наиболее частым проявлением которых является менингит (51–65%), септицемия – 12%, эпиглоттит – 10%, пневмония (с бактериемией) – 8% в структуре инвазивных Hib инфекций.
Наиболее часто Hib-инфекции подвержены дети в возрасте 6–48 мес, реже новорожденные и дети старше 5 лет. Подавляющее число заболевших приходится на возраст от 3 мес до 3 лет.
Факторами риска являются:
- посещение детских организованных коллективов (ясли, детские сады), особенно закрытого типа (дома ребенка, интернаты);
- искусственное вскармливание;
- иммунодефициты (первичные и вторичные, включая ВИЧ-инфекцию);
- хронические заболевания (сердца, легких, сахарный диабет).
Распространение инфекции происходит воздушно-капельным или бытовым путями передачи. В более редких случаях – при родах, от матери с гемофильной колонизацией генитального тракта.
Источником и основным резервуаром инфекции является только человек. В среднем среди здоровых детей бактерионосители составляют 2–5%, однако в окружении больного доля их может возрастать до 30% и выше. Уменьшение частоты носительства способствует снижению уровня заболеваемости. В странах, где введена вакцинация против Hib-инфекции, доля носителей в популяции здоровых детей снизилась до 0,5–1%.
Показания к обследованию
- Исследования по эпидемиологическим показаниям – среди контактных лиц в очаге Hib-инфекции (чаще всего Hib-менингит);
- профилактические исследования – с целью выявления уровня носительства в популяции, особенно в закрытых детских коллективах;
- диагностические исследования – при подозрение на заболевание эпиглоттитом, пневмонией, менингитом, септицемией, отитом, синуситом, гнойным артритом, остеомиелитом.
Материал для исследований
- Мокрота, лаважная жидкость, пунктаты (при подозрении на пневмонию); гнойное отделяемое, пунктаты; (средний отит, синусит); СМЖ, кровь; (менингит, менигоэнцефалит); кровь (септические состояния); пунктаты (гнойный артрит, остеомиелит); секционный материал; мазок из зева (обследование контактных в очаге Hib–менингита и проведение профилактических исследований) – культуральные исследования;
- СМЖ, кровь, пунктаты – обнаружение фрагментов ДНК;
- СМЖ, кровь – обнаружение АГ.
Этиологическая лабораторная диагностика включает микроскопию исследуемого материала, посев материала с дальнейшей культуральной и биохимической идентификацией возбудителя, определением антибиотикочувствительности; обнаружение генетических фрагментов ДНК Hib и АГ Hib в стерильных жидкостях организма.
Дифференциальная диагностика проводится с микробными агентами:
- При эпиглоттите – с возбудителями вызывающими истинный и ложный круп (C.diphtheriae, S.pyogenes, различные вирусы);
- при менингите – с возбудителями, вызывающими гнойный менингит (N.meningitidis, S.pneumoniae, S.aureus и др.);
- при пневмонии – S.pneumoniae, C.pneumoniae, M.pneumoniae, L.pneumophila, S.aureus, семействомEnterobacteriaceae, вирусами гриппа;
- при отите и синусите – S.pneumoniae, Ps.aeruginosa, S.aureus, M.catarrhalis, S.pyogenes, дрожжевые грибки родаCandida;
- при гнойном артрите, остеомиелите – S.aureus, E.coli, анаэробная инфекция.
Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики. Микроскопические исследования используют для выявления гемофильных палочек в разных видах биологического материала: ликворе, крови, пунктатах стерильных локусов, пунктатах нестерильных локусов (мокрота, мазки из зева, придаточных пазух, уха и др.). Микроскопия, как самостоятельное исследование, обычно не проводится, так как имеет малую диагностическую ценность. Микроскопическое исследование может использоваться только для решения вопроса пригодности мокроты или лаважной жидкости для посева (в мазке должно находиться более 25 сегментоядерных лейкоцитов и менее 10 эпителиальных клеток в поле зрения), а также определения микробных ассоциаций.
Для посева с дальнейшей культуральной и биохимической идентификацией возбудителя, определением антибиотикочувствительности используют материалы стерильных локусов (кровь, ликвор, синовиальную, перикардиальную, плевральную жидкости) и различный материал из нестерильных локусов.
Важной проблемой для лечения Hib-инфекции является рост устойчивости β-лактамным антибиотикам, в первую очередь ампициллину, обусловленных продукцией плазмидных β-лактамаз. Кроме того, в мире отмечается увеличение резистентности к гентамицину, эритромицину, левомицетину.
При определении чувствительности к антибиотикам культуры, выделенной из нестерильных локусов, в первую очередь исследуют устойчивость к ампициллину, ампициллину/сульбактаму, ко-тримоксазолу. Желательно провести тест на продукцию β-лактамаз с нитроцефином. В качестве дополнительных препаратов для характеристики штамма в исследование включают цефалоспорины II–III поколения, тетрациклины, макролиды, хлорамфеникол, фторхинолоны.
Штаммы, выделенные из ликвора и крови, исследуют на чувствительность к ампициллину, цефоласпоринам III поколения, карбапенемам, хлорамфениколу, другие препараты (тетрациклины, макролиды, фторхинолоны) добавляются для более полной характеристики культуры.
Обнаружение АГ Hib в стерильных жидкостях организма (ликворе, крови) выполняют при использовании наборов реагентов, основанных на реакции латекс-агглютинации или коагглютинации.
Обнаружение фрагментов ДНК Hib проводят методом ПЦР. Исследование основано на обнаружении специфического фрагмента гена bex A, кодирующего связанный с капсулой белок возбудителя и проводится только с материалом, полученным из стерильных локусов (СМЖ, кровь, пунктаты)
Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований. Диагноз Hib-инфекция считается установленным в случае:
- изоляции бактерий H.influenzae тип b из образцов биоматериала;
- выявления бактерий, сходных по морфологии с гемофильными палочками (полиморфных грам-отрицательных палочек), в образцах биоматериала, взятых из стерильных локусов и получения положительного результата выявления АГ в реакции латекс-агглютинации, используемой для выявления АГ;
- обнаружения специфических фрагментов ДНК Hib методом ПЦР в образцах биоматериала, взятых из стерильных локусов.