Донорская кровь в обязательном порядке тестируется для выявления АТ к ВИЧ. Однако такое исследование в ряде случаев неэффективно для обнаружения инфицированной крови в первую очередь из-за наличия серологического окна. Сокращение инфекционного риска, связанного с серологическим окном, возможно с помощью прямых методов выявления инфекционного агента. Одним из таких методов является выявление АГ вируса. В последние годы для диагностики ВИЧ донорскую кровь исследуют на наличие р24-антигена в комплексе с АТ к ВИЧ. Однако максимальной чувствительностью обладают тесты, направленные на выявление НК вируса. В постановлении Правительства РФ №1230«Об утверждении правил и методов исследований и правил отбора образцов донорской крови, необходимых для применения и исполнения технического регламента о требованиях безопасности крови, ее продуктов, кровезамещающих растворов и технических средств, используемых в трансфузионно-инфузионной терапии» говорится о необходимости проведения молекулярно-биологического скрининга донорской крови: «Молекулярно-биологические исследования проводятся дополнительно (до, после, одновременно) к обязательным иммунологическим исследованиям на маркеры вирусов иммунодефицита человека и гепатитов В и С и наиболее эффективны для обеспечения безопасности компонентов крови с коротким сроком годности (менее 6 месяцев), а также для свежезамороженной плазмы, не прошедшей карантинизацию».
Классический вариант тестирования донорской крови предполагает первичное определение АТ к ВИЧ (серологический скрининг), а затем выявление РНК ВИЧ только в серонегативных образцах. Однако при небольшом объеме исследований и невысокой частоте выявления серопозитивных образцов допустимо одновременное проведение определения АТ к ВИЧ и РНК ВИЧ. Для сокращения стоимости тестирования донорской крови, а также для повышения производительности анализа молекулярно-биологическое исследование часто проводят в формате мини- пулов.
РНК ВИЧ является оптимальным маркером для тестирования донорской крови в период серологического окна, т.к. появляется в крови раньше всех остальных (в среднем опережая р24-антиген на 5 дней) и быстро достигает максимальной концентрации. Преимуществом этого маркера является возможность сконцентрировать его из большого объема плазмы крови, а также одновременное тестирование других вирусных агентов. Использование тестов, выявляющих провирусную ДНК ВИЧ, приведет к снижению выявляемости ВИЧ, поскольку провирусная ДНК появляется позже РНК, а кроме того концентрация этого маркера не высока – процент инфицированных клеток редко превышает 1. Другим важным недостатком выявления провирусной ДНК является факт, что ДНК содержится в клетках крови, концентрировать которые не представляется возможным, что в свою очередь влияет на стоимость и производительность анализа.
Обнаружение АТ к ВИЧ и/или РНК ВИЧ в образце донорской крови является показанием для выбраковки образца, и донор отстраняется от донорства. Проведение скрининга в формате мини-пулов требует в ряде случаев проведения дополнительного этапа исследования – расшифровки позитивного мини-пула. Для этого необходимо каждый образец, входивший в позитивный пул, исследовать индивидуально. Обнаруженные при расшифровке позитивные по одному из маркеров индивидуальные образцы должны быть забракованы, а доноры подлежат отстранению от донорства и наблюдению у врача-инфекциониста. В случае получения отрицательного результата для всех индивидуальных образцов крови результат тестирования мини-пула расценивается как ложноположительный, и доноры признаются годными для кроводачи.
Для выявления РНК ВИЧ применяют методики, основанные на АНК (ПЦР в реальном времени, TMA, NASBA). Для исследования донорской крови должны использоваться наборы реагентов, аналитическая чувствительность которых составляет 500 копий/мл при тестировании индивидуальных образцов. При тестировании донорской крови в формате мини-пула должны использоваться наборы реагентов, чувствительность которых должна быть выше указанной пропорционально размеру пула, т.е., если мини-пул состоит из 10 индивидуальных образцов, то использовать можно набор реагентов с чувствительностью не ниже 50 копий/мл.
Показания к исследованию для обнаружения РНК ВИЧ
- Тестирование донорской крови и ее компонентов в дополнение к стандартному протоколу (выявление АТ);
- подозрение на недавнее инфицирование.