Возбудители гриппа – РНК-содержащие вирусы, относятся к семейству Orthomyxoviridae, в котором выделяют три рода – Influenzavirus A, Influenzavirus В и Influenzavirus С, каждый из которых имеет по одному виду – Influenza A virus, Influenza В virus и Influenza С virus. Вирусы гриппа А и В ежегодно вызывают эпидемии большей или меньшей интенсивности практически во всех странах мира. Вирусы гриппа А широко распространены в природе, их выделяют от большинства зверей и птиц, в связи с чем они имеют высокий пандемический потенциал, так как способны преодолевать межвидовые барьеры. Вирусы гриппа В выделяли только от людей. Вирусы гриппа С вызывают спорадические заболевания в форме ОРЗ. Вирусы гриппа А, В и С дифференцируют друг от друга с помощью иммунологических и молекулярно-генетических методов. Вирусы гриппа А дополнительно типируют на подтипы (или субтипы) в соответствии с антигенной структурой поверхностных гликопротеинов: гемагглютинина – на 16 субтипов и нейраминидазы – на 9 субтипов.
Эпидемии гриппа отличает высокая смертность, варьирующая среди разных возрастных групп и достигающая максимума у детей до 5 лет, пожилых людей и лиц с хроническими заболеваниями органов дыхания и сердечно-сосудистой системы. Однако во время пандемии гриппа в 2009 г., вызванной так называемым «свиным гриппом» А/H1N1pdm2009 (или A/H1N1sw2009), наибольший уровень летальности отмечался среди лиц от 30 до 64 лет. К группе риска относились лица, страдающие ожирением, заболеваниями сердечно-сосудистой системы и беременные женщины.
После перенесенного гриппа нередко наблюдаются осложнения в виде отитов и синуситов, пневмонии, вследствие присоединения бактериальных инфекций. Наиболее опасен грипп возможным быстрым развитием вирусной пневмонии с геморрагическим синдромом, приводящей к острой дыхательной недостаточности, что характерно для гриппа А/H1N1pdm2009. Дифференциальная диагностика гриппа и других ОРВИ возможна только с помощью лабораторных методов исследования.
Показания к обследованию. Острое начало с высокой лихорадкой (выше 38°С), продолжающейся до 3-х дней и синдромом интоксикации (головная боль преимущественно в области лба, боль в глазных яблоках, ломота в мышцах, сильная слабость) с последующим развитием катаральных явлений.
Материал для исследований
- Мазки из носоглотки – культуральное исследование, обнаружение АГ;
- мокрота, плевральная жидкость, аспираты из зева, БАЛ – выявление РНК вирусов (поражение нижних дыхательных путей);
- мазки со слизистой носоглотки и ротоглотки – выявление РНК вирусов (поражение верхних дыхательных путей);
- сыворотка крови – обнаружение АТ.
Этиологическая лабораторная диагностика включает культуральное исследование, выявление РНК возбудителей и их АГ, обнаружение специфических АТ.
Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики. Культуральное исследование основано на изоляции вирусов в живых культурах клеток млекопитающих или на развивающихся куриных эмбрионах с последующим определением активности гемагглютинации (агглютинации вирусами эритроцитов) и идентификацией субтипов гемагглютинина в реакции торможения гемагглютинации с типоспецифическими сыворотками. Методы отличаются трудоемкостью и длительностью, во многом зависят от качества не стандартизованных реагентов, в связи с чем для рутинной диагностики практически не используется, но применяется в эпидемиологических исследованиях.
Для обнаружения АГ вирусов гриппа применяют методы ИХА, ИФА, РИФ (МФА). Метод РИФ обладает низкой чувствительностью, недостаточной специфичностью и отличается субъективностью при интерпретации результатов анализа. При использовании ИХА велика вероятность ложноположительных результатов вне эпидемического подъема гриппа и ложноотрицательных – во время эпидемического подъема. Кроме того, быстрые тесты на основе РИФ и ИХА характеризуются низкой чувствительностью к пандемическому, так называемому «свиному» гриппу (40–60%). В связи с чем CDC для быстрой диагностики нового варианта гриппа А/H1N1pdm2009 рекомендовал использовать выявление РНК вируса методом ПЦР.
Использование в качестве мишени специфичных консервативных участков генома вирусов гриппа обуславливает высокие показатели диагностической чувствительности и специфичности ПЦР, приближающихся к 100% по сравнению с культуральной диагностикой. Преимуществами такого способа диагностики являются короткие сроки выполнения анализа, а также возможность типирования вирусов гриппа А и В и идентификации субтипа вирусов гриппа А, в том числе – нового пандемического варианта «свиного» вируса гриппа. Максимальный уровень специфичности и чувствительности имеют наборы реагентов с использованием ПЦР в режиме «реального времени».
При выявлении специфических АТ оценивают нарастание их титра в образцах крови полученных с интервалом в 2 недели (парные сыворотки) с использованием методов РТГА, РСК. Результаты в значительной степени зависят от состояния иммунной системы пациента.
Показания к применению различных лабораторных исследований. Выявление РНК вирусов гриппа методом ПЦР используется для быстрой этиологической диагностики гриппа и скрининга клинического материала в целях эпидемиологического надзора. Выявление АТ используется для определения уровня коллективного гуморального иммунитета, ретроспективной диагностики и ретроспективного анализа природы эпидемических вспышек гриппа.
Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований. Исследования методом ПЦР позволяют обнаружить РНК вируса гриппа А, В или С и/или определить подтип вируса гриппа А. Несоблюдение техники получения мазков из носоглотки и ротоглотки или использование данного материала при диагностике вирусной пневмонии, может сильно снизить информативность исследования вплоть до получения отрицательного результата.
Учитывая возможность сочетанного инфицирования вирусами гриппа и другими возбудителями ОРЗ, желательно проведение исследования полного спектра возбудителей.
В связи с недостаточной чувствительностью тестов для выявления АГ методами РИФ и ИХА получение отрицательных результатов при их использовании не исключает возможного инфицирования.