Билирубин – тетрапиррольный пигмент желтого цвета, образуемый преимущественно из гемовой части гемоглобина эритроцитов по окончании их 120-дневного жизненного цикла и, в существенно меньших количествах, при катаболизме других гемосодержащих белков (миоглобин, каталаза, пероксидаза, цитохромы). Образование билирубина происходит в клетках ретикулоэндотелиальной системы селезенки, лимфатических узлов, костного мозга и печени, откуда они попадают в сыворотку крови. Молекулы билирубина нерастворимы в воде, поэтому, в сыворотке крови они транспортируются только в комплексе с альбумином, с которым связаны электростатически. Эта фракция носит название неконъюгированного (свободного, непрямого) билирубина. Неконъюгированный билирубин токсичен для нервных клеток.
В гепатоцитах под действием фермента уридиндифосфат глюкуронилтрансферазы (К.Ф. 2.4.1.17) билирубин взаимодействует с глюкуроновыми кислотами, формируя эфиры. В результате реакции образуется хорошо растворимые в воде конъюгаты – моно- и диглюкурониды билирубина (конъюгированный, связанный, прямой билирубин).
Коньюгированный билирубин экскретируется с желчью, накапливается в желчном пузыре, выделяется в тонкий кишечник, где при действии микробной флоры восстанавливается с образованием бесцветных уробилиногенов. Большинство образованных уробилиногенов окисляется в уробилины и покидает организм с калом или мочой. Если уровень коньюгированного билирубина в сыворотке крови достаточно высок, он проходит через гломерулярную мембрану и экскретируется с мочой. Неконъюгированный билирубин, прочно связанный с альбумином в сыворотке крови, не проходит через гломерулярную мембрану. Накопление билирубина в крови и тканях приводит к развитию желтухи.
В лабораторной диагностике используют определение общего и прямого билирубина. Содержание непрямого билирубина рассчитывают как разность между общим содержанием билирубина и концентрацией прямого билирубина. В норме в крови 75–80% приходится на долю непрямого билирубина и 20–25% – на долю прямого. Исследование прямого билирубина малоинформативно при нормальной концентрации общего билирубина, однако при увеличении его уровня определение фракций необходимо для интерпретации результатов. Гипербилирубинемия имеет печеночное происхождение, если более 80% общего билирубина составляет прямой билирубин. Если же более 80% общего билирубина составляет непрямой, то говорят о гемолитической гипербилирубинемии.
Известны наследственные заболевания, при которых гипербилирубинемия обусловлена врожденной недостаточностью ферментов метаболизма билирубина – синдром Криглера-Нажара и синдром Жильбера (повышение содержания непрямого билирубина), синдром Добин-Джонсона и синдром Ротора (повышение содержания прямого билирубина).
Показания к исследованию
- Патология печени;
- гемолитическая анемия;
- холестаз;
- желтуха.
Особенности хранения образца. Образцы стабильны при хранении в темноте.
Метод исследования. Определение общего билирубина включает две стадии: растворение неконъюгированного билирубина и/или отщеплению его от молекулы альбумина при действии “акселератора” и взаимодействие растворенного билирубина (прямого и непрямого, т.е. общего) с диазореагентом (реактива Эрлиха) с образованием окрашенного продукта. Эти реакции дают представление о содержании в сыворотке крови общего, коньюгированного и неконъюгированного (прямого и непрямого) билирубина.
Наиболее распространенный метод определения прямого билирубина – колориметрический с использованием диазореагента (реактива Эрлиха). В реакцию с диазореактивом вступает только растворимый, конъюгированный (прямой) билирубин.
Исследование прямого билирубина малоинформативно при нормальной концентрации общего билирубина.
Повышенные значения
Непрямой билирубин
- Интенсивный гемолиз (гемолитические или В12-дефицитные анемии, малярия, массивные кровоизлияния, и др.);
- наследственные или приобретенные нарушения активности фермента, обеспечивающего биосинтез глюкуронидов билирубина.
Прямой билирубин:
- Поражение паренхимы печени;
- нарушение оттока желчи;
- нарушение секреции прямого билирубина в желчь.