Анализ эякулята (спермограмма)

Основной целью исследования эякулята является определение способности спермы к оплодотворению и выявление заболеваний и/или патологических процессов, вызвавших соответствующие поражения. Исследование спермы – неотъемлемая часть диагностики бесплодия. Примерно в 47% случаев причиной бездетности семейных пар является мужчина. Причиной бесплодия мужчин могут быть заболевания яичек, простаты, нарушения проводимости семявыводящих путей, заболевания и пороки развития уретры. Исследование семенной жидкости также является одним из тестов при диагностике гормональных расстройств, заболеваний половых органов или пороков их развития.

В норме эякулят представляет собой взвесь сперматозоидов в секрете яичек и их придатков, которая к моменту эякуляции смешивается с секретом предстательной железы, семенных пузырьков и луковично-уретральных желез.

Сперматозоиды составляют около 5% объема спермы, они образуются в семенниках. Приблизительно 60% объема спермы образуется в семенных пузырьках. Это вязкая, нейтральная или слегка щелочная жидкость, часто желтая или даже сильно пигментированная из-за высокого содержания рибофлавина.

Простата производит примерно 20% объема семенной жидкости. Эта жидкость, похожая на молоко, имеет слабокислую реакцию (рН около 6,5), в основном из-за высокого содержания лимонной кислоты. Простатический секрет также богат кислой фосфатазой и протеолитическими ферментами, считается, что протеолитические ферменты отвечают за коагуляцию и разжижение семенной жидкости.

Менее 10–15% объема спермы образуется в придатках яичек, семявыводящих протоках, бульбоуретральных и уретральных железах.

Стандартная спермограмма оценивает физические (макроскопические) и микроскопические параметры эякулята (Табл., рис. 1-3).

Показатель	Характеристика	Интерпретация
Цвет	Серовато-беловатый, слегка опалесцирующий	Норма
	Почти прозрачный	Концентрация сперматозоидов очень низка
	Красновато-коричневатый	Присутствие эритроцитов
	Зеленоватый	Пиоспермия
	Желтоватый	Желтуха, прием некоторых витаминов, при длительном воздержании
Реакция рН	7,2–7,8, слабо-щелочная	Норма
	Ниже 7,0	В образце с азооспермией – наличие обструкции или врожденного двустороннего отсутствия семявыносящих протоков
	9,0–10,0, щелочная	Патология предстательной железы
Объем	2–6 мл	Норма
	Менее 1 мл	Андрогенная недостаточность, эндокринные заболевания, сужения и деформации пузырьков, семявыводящих путей

Условия взятия и хранения образца

Эякулят должен быть получен после, как минимум, 48 ч, но не более 7 дней полового воздержания.

Эякулят, полученный путем мастурбации, необходимо собрать полностью и держать в тепле (20–40 оС). Образец стабилен один час, однако в случае, если подвижность сперматозоидов патологически низкая (менее 25% сперматозоидов с быстрым линейным поступательным движением), срок между получением и анализом образца следует свести к минимуму.

Метод исследования

Макроскопическое исследование – определение консистенции, объема, запаха, цвета, вязкости и рН эякулята.

Сперма, полученная при эякуляции, густая и вязкая, что обусловлено свертыванием секрета семенных пузырьков. В норме при комнатной температуре образец эякулята должен разжижаться в течение 60 мин. Если эякулят длительное время остается вязким, полувязким или вообще не разжижается, то можно предполагать воспаление предстательной железы. В норме объем эякулята составляет 2–6 мл. Количество менее 1,0 мл характерно для андрогенной недостаточности, эндокринных заболеваний, сужения и деформации пузырьков, семявыводящих путей. Максимальный объем может достигать 15 мл. Объем эякулята не влияет на фертильность. Запах нормального эякулята специфический и обусловлен спермином (напоминает запах «свежих каштанов»). Специфический запах становится слабым или отсутствует при закупорке выводных протоков предстательной железы. При гнойно-воспалительных процессах запах спермы обусловлен продуктами жизнедеятельности бактерий, вызвавших воспалительный процесс.

Микроскопическое исследование – изучение в нативном препарате подвижности сперматозоидов и наличия агглютинации, подсчет количества сперматозоидов в камере Горяева, изучение морфологии сперматозоидов, клеток сперматогенеза и дифференциальная диагностика живых и мертвых сперматозоидов в окрашенных препаратах.

Микроскопическое исследование эякулята проводят после полного его разжижения

Для оценки подвижности сперматозоидов рекомендуется использовать простую систему классификации по категориям. Для классификации 200 сперматозоидов последовательно просматривают в 5 полях зрения микроскопа (Рис. 1).

Подвижность каждого сперматозоида классифицируют по категориям, используя следующие критерии:

Сначала подсчитывают все сперматозоиды категорий а и b в ограниченном участке поля зрения или, если концентрация сперматозоидов низкая, во всем поле зрения (%). Далее в той же области подсчитывают сперматозоиды с непоступательным движением (категория с) (%) и неподвижные сперматозоиды (категория d) (%).

Определять подвижность можно с подсчетом в камере Горяева. Сперму разводят в 20 раз физиологическим раствором, в камере смотрят только неподвижные и малоподвижные сперматозоиды.

Расчет ведут по формуле:

Х = А – (В + С), где,

А – общее количество сперматозоидов;

В – количество малоподвижных сперматозоидов;

С – количество неподвижных сперматозоидов.

Отсюда количество активно подвижных сперматозоидов в процентах составляет (Y):

Y = Х * 100/А.

Подвижность сперматозоидов зависит от времени года и суток. Имеются данные, что весной происходит снижение подвижности сперматозоидов (сезонные колебания). При наблюдении за количеством активно-подвижных сперматозоидов в течение суток было отмечено увеличение их количества во второй половине дня (суточные ритмы).

Снижение подвижности сперматозоидов ниже нормы – астенозооспермия. Незначительной степени астенозооспермии – количество активно- и малоподвижных сперматозоидов c поступательным движением в сумме составляет менее 50%, но более 30%.

Оценка агглютинации сперматозоидов. Под агглютинацией сперматозоидов подразумевают склеивание подвижных сперматозоидов между собой головками, хвостами или головок с хвостами. Склеивание неподвижных сперматозоидов друг с другом или подвижных сперматозоидов с нитями слизи, другими клетками или остатками клеток следует считать и регистрировать не как агглютинацию, а как неспецифическую агрегацию. При исследовании регистрируют тип агглютинации (головками, хвостами, смешанный вариант). Можно использовать полуколичественный метод оценки степени агглютинации от «–» (отсутствие агглютинации) до «+++» (тяжелая степень, при которой все подвижные сперматозоиды подвержены агглютинации). В норме склеиваются не более 3–5%. Если количество агглютинированных сперматозоидов составляет 10–15%, можно говорить о понижении их оплодотворяющей способности.

Подсчет общего количества сперматозоидов проводят в камере Горяева. Общее количество сперматозоидов в эякуляте рассчитывают, умножая количество сперматозоидов в 1мл спермы на объем выделенной спермы.

Нормоспермия – у здорового мужчины в 1 мл эякулята содержится более 20 млн. сперматозоидов.

Полизооспермия – количество сперматозоидов в 1 мл эякулята превышает 150 млн.

Олигозооспермия – в 1 мл эякулята содержится менее 20 млн. сперматозоидов.

Азооспермия – отсутствие сперматозоидов в эякуляте.

Аспермия – в доставленной жидкости нет сперматозоидов и клеток сперматогенеза.

Оценка жизнеспособности сперматозоидов. Для оценки жизнеспособности сперматозоидов смешивают на предметном стекле одну каплю свежего эякулята с каплей стандартного красителя эозина. Живые сперматозоиды в таких препаратах не окрашиваются (белые); мертвые сперматозоиды окрашиваются в красный цвет, т.к. повреждены их плазматические мембраны. Под жизнеспособностью подразумевают долю (в процентах) «живых» сперматозоидов. Жизнеспособность следует оценивать, если процент неподвижных сперматозоидов превышает 50%.

Оценка жизнеспособности может служить контролем точности оценки подвижности сперматозоидов, поскольку процент мертвых клеток не должен превышать (с учетом ошибки подсчета) процента неподвижных сперматозоидов. Наличие большого количества живых, но неподвижных сперматозоидов, может указывать на структурные дефекты жгутиков. Сумма мертвых и живых сперматозоидов не должна превышать 100%.

Характеристика клеточных элементов эякулята. Обычно эякулят содержит не только сперматозоиды, но и другие клетки, которые в совокупности обозначают, как «круглые клетки». К их числу относят эпителиальные клетки мочеиспускательного канала, клетки предстательной железы, незрелые половые клетки и лейкоциты. В норме эякулят не должен содержать более 5*106 круглых клеток/мл.

В большинстве случаев эякулят человека содержит лейкоциты, в основном нейтрофилы. Повышенное содержание этих клеток (лейкоспермия) может свидетельствовать о наличии инфекции и о плохом качестве сперматозоидов. Число лейкоцитов не должно превышать 1106/мл. Подсчет ведут в камере Горяева аналогично подсчету сперматозоидов.

Эякулят кроме лейкоцитов может содержать незрелые половые клетки (клетки сперматогенеза) на разных стадиях созревания: сперматогоний, сперматоцит I порядка, сперматоцит II порядка, сперматид. (рис. 2)

Наличие в эякуляте различных типов незрелых клеток сперматогенеза обычно говорит о его нарушении. Избыток этих клеток является следствием нарушения функции семенных канальцев, в частности, при сниженном сперматогенезе, варикоцеле и патологии клеток Сертоли.

Оценка морфологии сперматозоидов. Для анализа используют мазок, окрашенный гистологическими красителями (гематоксилин, Романовский-Гимза и др.), в котором производят последовательный подсчет 200 сперматозоидов (однократный подсчет 200 сперматозоидов предпочтительней двукратного подсчета 100 сперматозоидов) и выражают в процентах количество нормальных и патологических форм (Рис. 3).

Головка сперматозоида должна быть овальной формы. Отношение длины головки к ее ширине должно составлять от 1,5 до 1,75. Должна быть видна хорошо очерченная акросомная область, составляющая 40–70% площади головки. Шейка сперматозоида должна быть тонкой, составлять 1,5 длины головки сперматозоида и прикрепляться к головке вдоль ее оси. Размеры цитоплазматических капель не должны превышать 1/2 размера головки нормального сперматозоида. Хвост должен быть прямым, одинаковой толщины на всем протяжении и несколько уже в средней части, не закрученным и иметь длину около 45 мкм. Отношение длины головки к длине хвоста у нормальных сперматозоидов 1:9 или 1:10.

Дефекты головки: большие, маленькие, конические, грушевидные, круглые, аморфные, с вакуолями в области хроматина; головки с маленькой акросомальной областью, вакуолизированной акросомой, с несимметрично расположенной акросомой; двойные и множественные головки, головки с компактным строением хроматина и т.д.

Дефекты шейки и средней части: «склоненная» шейка (шейка и хвост образуют угол 90° к длинной оси головки), асимметричное прикрепление средней части к головке, утолщенная или неравномерная средняя часть, патологически тонкая средняя часть (отсутствие митохондриальной оболочки) и их любая комбинация.

Дефекты хвоста: хвосты короткие, множественные, в виде шпильки, сломанные, наклонные (угол больше 90°), неравномерная толщина хвоста, тонкая средняя часть, закрученный конец, закрученный полностью и их любая комбинация. При дифференцированном морфологическом подсчете учитываются только сперматозоиды с хвостами.

Тератозооспермия – увеличение количества патологических форм сперматозоидов выше референсных значений. Выраженная тератозооспермия резко снижает шансы оплодотворения и увеличивает вероятность пороков развития у плода, если оплодотворение произошло. Тератозооспермия обычно сочетается с олигозооспермией и астенозооспермией.

Сперматозоиды, у которых головка заключена в цитоплазматическую каплю, и те, у которых цитоплазматическая капля расположена на шейке в виде шарфа и по отношению к размеру головки составляет более 1/3, выделяются как незрелые или юные. В нормальной спермограмме они составляют около 1%.

Референтные интервалы

• Объем – 2,0 мл или более;
• рН – 7,2 или более;
• концентрация – 20 *106 сперматозоидов/мл или более;
• общее количество – 40 *106 сперматозоидов и более в эякуляте;
• подвижность – 50% или более подвижных (категория а+b); 25% или более с поступательным движением (категория а) в течение 60 мин после эякуляции;
• жизнеспособность – 50% или более живых, т.е. не окрашенных;
• лейкоциты – менее 1 *106/мл.

Классификация показателей эякулята

• Нормозооспермия – нормальный эякулят;
• олигозооспермия – концентрация сперматозоидов ниже нормативных значений;
• астенозооспермия – подвижность ниже нормативных значений;
• тератозооспермия – морфология ниже нормативных значений;
• олигоастенотератозооспермия – наличие нарушений всех трех показателей;
• азооспермия – нет сперматозоидов в эякуляте;
• аспермия – нет эякулята.